B.4操作步骤

　　B.4.1将硼酸缓冲液1OOmL加琼脂糖0.8g，加热融化混匀后，浇在玻璃板上，厚度2mm，每块约8.4mL。

　　B.4.2待琼脂糖冷却后，用打孔器打成一系列孔，可呈梅花形或三角形(见图Bl)。大孔径llmm，小孔径5mm，二边距5mm用注射针头将孔中琼脂挑出，并将孔中残余琼脂用吸管吸出。打孔时应注意勿使琼脂底部与玻板间有气泡，注意封底。

　　B.4.3在大孔中加入待测血清，小孔中加入已知抗原，约加至与孔口相平。

　　将上述双扩板水平放入含1%苯酚的湿盒内，置于室温(25)下，24-72h观察结果。需要时可进行染色观察，或晾干制成薄膜长期保存。

　　B.5结果判定

　　抗原和抗体(血清)互相扩散，如果有白色沉淀线形成，则判定为阳性结果(见示意图)。

　　A、B表示可在一块板上测两份血清样本。

　　表A.1双向扩散板打孔排列示意图

　　1～6:不同抗原编号，即一份血清可同时用6种抗原进行测定。A、B可共用1、2两号抗原。

　　测定时可根据实际需要，使用不同大小的玻板，一块板上的孔排列也可按上述的间距和孔径原则自行设计。