1．每次使用前应检查生物安全柜的正常指标，包括风速、气流量和负压在正常范围。若出现异常应停止使用，进行检修工作。
2．在使用中不能打开玻璃观察窗。
3．生物安全柜内应尽量少放器材或样品，不能影响后部压力排风系统的气流循环。
4．生物安全柜内不能使用酒精灯，允许使用微型电加热器，最好使用一次性无菌接种环。
5．所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。操作者不要频繁移动手臂及挥动手臂以免破坏定向气流。
6．尽量减少操作者身后的人员走动以及快速开关房间的门，以防止对生物安全柜的气流造成影响。
7．操作时废物袋以及盛放废弃吸管的容器等必须放在安全柜内而不应放在安全柜之外。污染的吸管、容器等应先在放于安全柜内的装有消毒液的容器中消毒1h以上，方可转入医疗废物专用垃圾袋中进行高压灭菌等处理。
8．洁净物品和使用过的污染物品要分开放在不同区域，工作台面上的操作应按照从清洁区到污染区的方向进行，以避免交叉污染。
9．工作开始前和结束后，安全柜的风机至少运行5min，工作完成后应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。
10．生物安全柜内不能进行文字工作。