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高效液相色谱法同时测定食品中纳他霉素和富马酸二甲酯的含量

文档作者：官咏仪1，邱志超扩，金梦1，宋阳1，张美金1，陈毓芳1，谢玉珊1 文档来源： (1．广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 2．广州质量监督检测研究院		点击数：	更新时间： 2025年06月28日
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第8卷第6期食品安全质量检测学报Vbl．8 No．6
2017年6月Joumal ofFood Safety and Quality Jun．，2017
高效液相色谱法同时测定食品中纳他霉素和
富马酸二甲酯的含量
官咏仪1，邱志超扩，金梦1，宋阳1，张美金1，陈毓芳1，谢玉珊1
(1．广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广州510623；2．广州质量监督检测研究院，广州511447)
摘要：目的建立高效液相色谱法同时测定食品中纳他霉素、富马酸二甲酯的分析方法。方法样品用甲
醇溶解提取、超纯水定容，Agilent Tc．c18柱色谱分离，采用高效液相色谱-光电二极管阵列检测器进行检测，
并以峰面积外标法定量。结果在4种基质、4个添加水平下，纳他霉素的平均回收率在88．1％～97．7％之间，相
对标准偏差为2．47％～5．72％，检出限为0．10 mg／kg；富马酸二甲酯的平均回收率在84．5％～104％之间，相对标
准偏差为1．21％～5．28％，检出限为0．05 mg／蚝。结论该方法具有操作简便、快速、准确的特点，适用于食品
中纳他霉素、富马酸二甲酯的含量分析。
关键词：高效液相色谱法；纳他霉素；富马酸二甲酯
Simultaneous determination of natamycin and dimethyl fumarate in foods by
high perfbrmance liquid chromatography
GUAN Yong—Yil，QIU Zhi—Chao扩，JIN Men91，SoNG Yan91，ZHANG Mei—Jinl，
CHEN Y-u—Fan91，XIE Yru—Shanl
(1．^％￡p已cffo玎口咒d Q“口，‘以珂ffn已Z吝c^nD正9呈∥CP胛据r，G“Ⅱ玎。宝臼。玎g．￡抽f，)，一．￡强豇砌置PecfiD胛口玎d Q“口，。口玎fi胛P曰“，它口甜，
Gzf口以罟z五D“5 1 0623，(瑰in以；2．G“以胛gz矗o“Q“a，f钞-S缸pe，V括fo玎and 7匆sffng砌sf打“fe，G“口聆gz矗D“5 1 1447，(璃i玎n)
ABSTRACT：objective Tb establish a method for simultaneous detemination ofnatamycin and dimethyl fumarate
(DMF)in foods by high perfomance liquid chromatography(HPLC)．Methods S啪ples were extracted by
methanol and water，separated by Agilent TC—C18 column，detected by HPLC with photo—diode array detector(PDA)
and quantified by the extemal standard method．Results At 4 dif佗rent spiked 1evels in 4 kinds of food，the aVerage
recoveries of natamycin were between 88．1％～97．7％，with the RSD of 2．47％～5．72％．The aVemge recoVeries of
dimethyl fIlmarate were between 84．5％～104％，with the RSD of 1．21％～5．28％．Detection 1imits of nat砌ycin and
DMF were 0．1 0 mg／埏and O．05 m∥蚝，respectively．conclusion This method is simple，fast and accurate，which
can be applied to the analysis of the contem of natamycin and DMF in foods．
KEY WoItDS：hi曲perfbmance liquid cllromatogr叩hy；natamycin；dimethyl如m缸ate
1 引言
纳他霉素(natamycin)，也称游链霉素、匹马菌素或海
松素，是一种重要的多烯类抗菌素，能够有效抑制酵母菌
等真菌的生长，且其难溶于水和油脂，难以被人体消化、
吸收，大部分摄入的纳他霉素会随粪便排出，对人体造成
t通讯作者：邱志超，硕士，质量工程师，主要研究方向为食品质量与安全检测。E-mail：392479231@qq．com
+correspoⅡding author：QIu zhi—chao，Master，QuaI埘Engineer，Guangzhou Quality supeⅣision and Testing Institute，No．1—2，zhujiang Road，
Chao Tian In“strial zone，Shilou Town，Pan”District，Guangzhou 511447，China．E—mail：39247923l@qq．com
万方数据
第6期官咏仪，等：高效液相色谱法同时测定食品中纳他霉素和富马酸二甲酯的含量2247
的毒性伤害极低，因而被批准用于食品的防腐¨21。GB
2760一2014《食品添加剂使用标准》中对纳他霉素在食品中
的最大使用量及表面使用残留量作出了规定，其中表面使
用残留量不得大于10 mg／1(扩1。富马酸二甲酯(dimethyl
fumarate，DMF)化学名为反丁烯二酸二甲酯，别名延胡索
酸二甲酯，能够有效抑制多种霉菌、酵母菌和细菌的生长，
进入人体后能分解成人体新陈代谢的正常成分“富马酸”，
曾经被认为是一种低毒、高效、有前途的防腐剂而被广泛
应用于食品中【4，5】。但近年来，欧盟通报了多起消费者因接
触富马酸二甲酯而受伤的案例，有研究表明富马酸二甲酯
易水解成甲醇，会对人体肠道、内脏造成腐蚀性损害，如
长期食用对肝、肾有较大的副作用【5]。2009年2月，全国
打击违法添加非食用物质和滥用食品添加剂专项整治领导
小组发布的《食品中可能违法添加的非食用物质名单(第二
批)》(食品整治办(2009]5号)【6]文件中，明确规定了富马
酸二甲酯属于食品中可能违法添加的非食用物质。
目前，测定纳他霉素的常见方法有高效液相色谱法
[7】、液相色谱一质谱联用法[8]、生物检测法【9】和加压毛细管
电色谱[1 o】等。富马酸二甲酯常见的测定方法有高效液相色
谱法[111、液相色谱．质谱联用法‘51、气相色谱法[12】、气相色
谱．质谱联用法[1 3]和薄层法[】4]等。最常用的为液相色谱法
[1 5’1”，但流动相中多含缓冲盐或偏酸，不利于色谱柱的长
久使用维护，针对多类食品同时开展纳他霉素和富马酸二
甲酯含量检测的文章报道也鲜少见到。本研究采用高效液
相色谱法同时测定食品中的纳他霉素和富马酸二甲酯，具
有高效、快速、准确、广泛、高通量的优点，为愈发繁重
的食品安全检测工作提供了便利。
2材料与方法
2．1仪器与试剂
waters alliance e2695高效液相色谱仪(配备光电二极
管阵列检测器，美国waters公司)；BT 124s电子天平(德
国sanorius公司)；sw 30H超声波清洗机(瑞士s0N0
swIss公司)；Multi ReaX涡旋振荡器(德国Heid01ph公司)；
4K15高速离心机(德国Sigma公司)；微孔有机相滤膜(孔径
为0．22¨m)。
甲醇(色谱纯，美国Thenno Fisher scientific公司)；超
纯水(由Mill．Q纯水器系统制得)；纳他霉素(纯度91．1％，
美国药典)；富马酸二甲酯(纯度99．5％，德国
Dr．Ehrenstorfer公司1。
牛奶、糕点、熟肉、饮料购于当地超市。
2．2实验方法
2．2．1标准溶液的配制
分别称取约25 mg纳他霉素、富马酸二甲酯标准物质，
用甲醇：水(1：1，旷功溶解定容至25 mL，配制成1000 m∥L
的标准储备液，于一20℃下保存。临用前分别移取适量纳他
霉素、富马酸二甲酯的标准贮备液至同一容量瓶中，用甲
醇：水(1：l，垆功定容稀释配制成100 mg／L的混合标准溶液，
然后用甲醇：水(1：1，矿功逐级稀释得到质量浓度为0．05、
0．10、0．20、O．50、1．00、2．00、5．00、10．00、20．00 m∥L
的系列标准溶液。
2．2．2样品前处理
称取5．00 g样品于50 mL具塞塑料离心管中，加入30
mL甲醇，超声10 min、涡旋15 min溶解提取。用超纯水
定容至50 mL，混匀后放人冰箱冷冻30 min左右，10000
r／min高速低温离心5 min，经0．22 um有机相滤膜过滤后，
供液相色谱上机分析。
2．2_3 色谱条件
色谱柱：A皇ilent Tc·c18色谱柱(250 mm×4．6 mmj 5
肚m)；流动相为甲醇：水(65：35，矿"；流速为0．8 mL／min；
柱温为25℃；进样量为20此；波长为218砌。
2．3数据处理和统计方法
采用Empower3软件进行数据处理，输出线性回归方
程和含量结果。4种基质分别进行空白实验和4个添加浓
度水平的加标回收率实验，其中空白实验采用2个平行重
复实验后取平均值。加标实验每个添加浓度进行6平行，
各自扣除空白后计算回收率实验，最终得出平均回收率和
相对标准偏差。
3结果与分析
3．1分析条件的优化
3．1．1流动相的选择
参考各类标准方法和文献，一般以乙酸钠一甲醇、乙酸
铵．甲醇、甲醇一水一乙酸为流动相，这些流动相一般存在缓
冲盐比例较高、pH值偏酸的特点，不利于色谱柱的长久使
用与维护。本研究选用常用的甲醇：水(65：35，"功作为流动
相。如图1所示，在此流动相下，纳他霉素和富马酸二甲
酯标准品峰形对称、分离度高。图2为4种不同基质的样
品加标色谱图，基质本底皆不含纳他霉素和富马酸二甲酯，
加标浓度为50 mg／L，其中牛奶、糕点、饮料样品色谱图，
目标峰周围无干扰峰，分离度高；熟肉样品因样品基质复
杂，富马酸二甲酯左侧有一小干扰峰，因而回收率比其他
3种基质略低，但仍达到80％，满足检测要求。
3．1．2检测波长的选择
取20皿质量浓度为20 mg／L的纳他霉素和富马酸二
甲酯混合标准溶液，在波长200～310 nm范围内扫描。结果
显示(见图3)，富马酸二甲酯和纳他霉素的最大吸收分别
出现在210 nm和303 nm处，当纳他霉素出现最大吸收时
富马酸二甲酯已趋向于无吸收。在215～225 nm范围内，富
马酸二甲酯一直保持高响应，纳他霉素的响应值也能保证
在105以上且变化不大。同时，为了避免在分析检测过程
万方数据
2248 食品安全质量检测学报第8卷
中仪器可能出现的波动导致保留时间变化，所以设置方法
时不考虑波长变化时间的设定，最终选取218 11IIl作为本
研究的分析波长。
3．1．3提取溶液的选择
骆健美等[¨1研究纳他霉素在不同溶剂中的溶解度，
发现纳他霉素在甲醇中的溶解度最好。富马酸二甲酯在食
品中的检测农业标准中用氨水：甲醇(1：20，矽功提取后再用
盐酸调节pH值[11】，但刘义等[161在实验过程中发现富马酸
二甲酯在碱性条件下会发生分解，之后通过酸调节pH值
也不可逆，且富马酸二甲酯在甲醇中易溶，因此选用甲醇
作为提取溶液。因为流动相为甲醇：水(65：35，旷功，所以经
甲醇提取后用超纯水进行定容，使上机溶剂浓度比例接近
流动相。引6
3．2方法学验证o．10
3．2．1 标准曲线及检出限
在O．1～20．0 mg／L质量浓度范围内，线性良好，得到
纳他霉素标准曲线回归方程为p3．77×10％1．35×103，富
马酸二甲酯标准曲线回归方程为y_1．27×10’尉7，74×102，
线性相关系数，均大于0．999。分别以糕点、牛奶、熟肉、
饮料为基质，逐级稀释混合标准溶液上机分析，通过3倍
信噪比，得出纳他霉素和富马酸二甲酯的检出限分别为
焉|——业—上o‘00匕==二二二=：==蕉2====]圭三【=
l：富马酸二甲酯(dimethyl fumarate)；2：纳他霉素(natarnycin)
图1富马酸二甲酯、纳他霉素标准(20 mg／L)色谱图
Fig．1 Chromatogram of dimethyl fumamte and natamycin standard
(20 mg／L)
1：富马酸二甲酯(dimethyl fumarate)；2：纳他霉素(natamycin)
图2 富马酸二甲酯、纳他霉素样品加标(50 m∥L)色谱图
Fig．2 chmmatograms of dimethyl mrnamte and natamycin spiked samples(50 m∥L)
万方数据
第6期官咏仪，等：高效液相色谱法同时测定食品中纳他霉素和富马酸二甲酯的含量2249
3．5×106
2．5×106
2．O×106
l 5×106
1．O×106
5．O×105
200 205 2lO 215 220 225 230 235 240 245 250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 3l
图3不同检测波长的响应值
Fig．3 Response signal values of difkrent detected waVelengms
表1 4种基质中纳他霉素和富马酸二甲酯的加标回收率和相对
标准偏差0=6)
Thble 1 Results of recoveries and relative standard deviations of
natamycin and dimethyI fumarate in 4 I【inds of food(栉=6)
4结论
本研究选用4种具有代表性的食品基质，分别添加不
同浓度水平的标准物质，经甲醇超声提取、超纯水定容后，
一波长(nm)
O
在优化的高效液相色谱条件下进行上机分析，纳他霉素和
富马酸二甲酯皆有良好的线性、回收率和相对标准偏差。
本方法具有灵敏度高、稳定性好、快速简便的优点，能够
广泛应用于各类食品中高通量同时检测纳他霉素和富马酸
二甲酯。
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(责任编辑：杨翠娜)
日
官咏仪，食品检验工程师，主要研究
方向为食品营养成分和添加剂检测。
E—mail：stupid625@qq．com
邱志超，硕士，质量工程师，主要研
究方向为食品质量与安全检测。
E-ma订：39247923 l@qq．com

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